Способ получения материала для гистологического исследования
6 отраслей медицины, в которых активно используется гистологическое исследование
Что же такое гистологическое исследование? Это специальный метод диагностики, при котором объектом исследования является орган (ткань органа, маленький кусочек), который изучается (исследуется) под микроскопом. Такая диагностическая процедура позволяет выявить изменения на клеточном уровне, ещё до появления изменений органа, заметных невооружённым глазом!
Значение гистологического исследования для современной медицины
Нельзя преуменьшить роль гистологии в современной медицине. Особенно в диагностике злокачественных новообразований (рак), ведь правильно установленный диагноз (правильно установленный вид опухоли) — это уже 50% успеха в лечении.
Гистологические исследования применяются практически всеми врачами различных специальностей (гинекологи, онкологи, патологоанатомы, гастроэнтерологи, хирурги, урологи и т.д.).
Суть гистологического исследования
Анализ на гистологию назначить может любой доктор, к которому Вы попали на приём. Для чего назначается такой анализ? Конечно же, анализ на гистологию назначается не всем и не во всех случаях, для этого должны быть определённые показания.
Если, например, исследования (рентгенограмма, УЗИ, КТ, МРТ и т.д.) не дают точного ответа на поставленные врачом вопросы и невозможно поставить точный диагноз. А без точного диагноза навряд ли получится качественное лечение Вашего заболевания.
С какой целью выполняется гистологическое исследование?
Техника выполнения
Любой гистологический препарат изучается под микроскопом световым или электронным, это зависит от оснащённости лаборатории. Но в основном, конечно, изучается препарат (биоптат) под световым микроскопом.
Изучает и даёт заключение врач-гистолог или патологоанатом (патологоанатом — это не только работник морга, врачи этой специальности обязательно владеют техникой микроскопического исследования препарата!). Подготавливают препараты к исследованию лаборанты.
Чтобы гистологически исследовать ткань, нужны особые приготовления.
- Самое первое, что происходит – это забор материала (биоптата), изначально кусочек органа должен быть помещён в специальный раствор (формалина или спирта), это делается для фиксации ткани и для предотвращения различных гнилостных процессов.
- Затем биоптат заливают парафином (получатся плотный квадратик).
- Следующее – на специальном аппарате делают тонкие срезы, чтобы слои клеток не накладывались друг на друга, это улучшает качество препарата.
- Окрашивание препаратов. Для того чтобы изучить различные структуры или изменённые клетки, используются специальные красители.
- Ну и, в конце концов, для того чтобы препарат сохранялся дольше, происходит его дальнейшая специальная обработка.
Интерпретация результатов гистологического исследования
Врач–гистолог получает материал и начинает он с описания макроскопической картины. То есть в начале он описывает внешний вид (цвет, плотность, видимые изменения поступившего к нему органа или кусочка ткани). Затем препарат готовится (информация об этом представлена выше) и изучается уже непосредственно под микроскопом. Изучается микроскопическая картина, которой врач-гистолог даёт описание и в конце ставит диагноз.
В направлении на гистологию лечащим врачом часто указывается предварительный диагноз или диагноз под вопросом, который, собственно, может подтвердиться или нет.
Бывают ли ошибки в результатах гистологии?
К сожалению, ошибки, бывают везде! Поэтому исследование иногда проводится несколько раз. Дело не всегда в недобросовестном отношении врача, бывают ситуации, когда забор материала изначально сделан неправильно. Поэтому биоматериал следует брать точно из изменённой ткани (участков органа).
Также и в лаборатории неправильная подготовка материала для исследования, плохое оснащение и истёкший срок годности реактивов могут повлиять на результат.
Поэтому все этапы от забора материала и до изучения врачом-гистологом должны соблюдаться с особой точность и аккуратностью.
В каких отраслях медицины гистология имеет большое значение
Гистологические исследования назначаются практически всеми врачами. Но наиболее распространён этот метод в онкологии. В онкологических диспансерах имеется специальное отделение патологической анатомии, куда и отправляются материалы, где выставляется точный диагноз.
Гинекология
В гинекологии используют такие методы забора материала, как мазки, кюретаж (выскабливание), исследование целого или части органа. Большой процент заболеваний женской половой системы подразумевает сам собой направление некоторых материалов на гистологию.
При подозрении на какие заболевания могут отправить материал на гистологию? Это:
- рак матки (шейки или тела);
- рак яичников;
- рак молочных желёз;
- дисплазия матки;
- эрозии;
- аборт и т.д.
Это далеко не все заболевания, а лишь малое их количество. В последнее время рост заболеваний среди женщин (именно женская патология) увеличивается, особенно онкологических.
Гастроэнтерология
В гастроэнтерологии чаще всего взятие исследуемого материала происходит при эндоскопическом исследовании (ФГДС), то есть можно оценить и внешний вид изменённого участка и плюс ко всему взять биоптат. Таким образом определяется гастрит, язвы, опухоли, в биоптате также можно определить возбудителя язвенной болезни – бактерию хеликобактер пилори (гистохимическое исследование).
Следует помнить о том, что язвенная болезнь и эрозивные гастриты — это предраковые состояния, поэтому таким пациентам следует хотя бы раз в год проходить обследование (эндоскопическое) своего желудочно–кишечного тракта.
Онкология
Повторюсь ещё раз — это самая обширная группа заболеваний (онкологические заболевания), которая требуют именно этого метода исследования. Диагноз, который подтверждён гистологически, называется верифицированный диагноз.
Почему именно при онкологических заболеваниях обязательно отправляют материал для исследования? Существует великое множество различных видов опухолей, которые могут быть похожи друг на друга макроскопически, но при детальном микроскопическом исследовании различаться. Лечение той или иной опухоли зависит от её строения и вида ткани, из которой она происходит, поэтому точное определение диагноза очень важно в этом случае.
Другие области исследования
Гистологические исследования широко используются в эндокринологии (исследования щитовидной железы), особенно при аутоиммунных её поражениях, когда анализы гормонов не дают полную и точную картину.
Исследование предстательной железы также широко распространено, это связано с частыми заболеваниями у мужчин после 40 лет.
Гистологический анализ также важен в гематологии, он используется как для определения опухолевых процессов (лейкозы хронические и острые), так и для установления характера анемии (например В12-дефицитная анемия, используется пункция костного мозга).
Перечислять можно бесконечно. Проще говоря, любой орган и ткань могут быть подвержены гистологическому анализу. Так как каждая ткань имеет определённое строение и определённые клетки в своём составе, при наличии изменений черты строения меняются и уже можно заподозрить патологию.
Расценки на гистологическое исследование
В коммерческих лабораториях цены примерно одинаковые, в общий чек входит забор материала (биоптата) плюс само исследование. В общем, цена варьирует в общей сложности от 1500 рублей до 25 000 – 30000 рублей. Результаты анализов можно получить в течение 5 – 7 дней.
Заключение
Гистологическое исследование, а именно забор биопсийного материала проводится чаще всего под контролем УЗИ, поэтому не стоит бояться идти на такую процедуру.
Важно понять, что такое исследование в некоторых случаях является необходимостью! Помните, что залог успеха в лечении – правильно поставленный диагноз, для постановки которого как раз и используется гистологическое исследование.
Литература
- Гистология, цитология, эмбриология, Афанасьев, 2002 г, 744 с.
- В. В. Давыдов, М. М. Лапкин, В. О. Самойлов, В. А. Черешнев, МОРФОЛОГИЯ ТКАНЕЙ.
- А. Г. Гунин, Электронный атлас микрофотографий по гистологии.
- Ю. В. Каминский, В. С. Тимошенко, О. Г. Полушин УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ по патологической анатомии и биопсийно-секционному курсу.
Мы приложили много усилий, чтобы Вы смогли прочитать эту статью, и будем рады Вашему отзыву в виде оценки. Автору будет приятно видеть, что Вам был интересен этот материал. Спасибо!
Гистологическое исследование: когда оно назначается, как проводится и что показывает
Гистологическое исследование биопсийного материала — один из основных методов лабораторной диагностики новообразований. Это высокоточный способ, позволяющий оценить состояние и структуру клеток, поставить верный диагноз и проконтролировать эффективность терапии.
Что собой представляет гистологическое исследование
Гистологическое исследование — это изучение клеток биоптата (образца пораженной ткани) под микроскопом. Звучит достаточно просто, однако на самом деле метод этот довольно сложный, он предполагает различные технологии обработки биоматериала и различные способы микроскопии.
Биоматериалом для гистологического исследования могут быть образцы различных тканей — кожи, слизистых оболочек, мышц. Иногда гистологическому исследованию подвергается мазок — клетки эпителия, снятые при помощи специальной мягкой щеточки.
Методы проведения анализа
Методы гистологического исследования различаются по способу микроскопии. Выбор обычно определяется целями исследования: нужно ли качественное или количественное определение, выявление химического состава или внешних патологий структур…
Среди применяемых подходов можно выделить следующие методы микроскопии:
- Световая — просвечивание в видимой части спектра.
- Фазово-контрастная , позволяющая изучать клетки без окрашивания. Разновидностью этого метода является темнопольная микроскопия, дающая негативное изображение.
- Интерференционная микроскопия, которая дает возможность определять концентрацию вещества в клетке и проводить количественные морфологические измерения.
- Поляризационная , позволяющая определять характер расположения молекул в клетке.
- Люминесцентная (флуоресцентная) , при которой клетки окрашиваются специальными красителями, заставляющими их светиться во флуоресцентном освещении.
- Ультрафиолетовая — просвечивание в ультрафиолетовой части спектра.
- Электронная , при которой для просвечивания используется не свет, а направленный пучок электронов.
- Радиоавтография — исследование, предполагающее использование изотопных меток, позволяет оценить скорость обменных процессов в клетке.
- Цитоспектрофотометрия — изучение химического состава клетки [1] .
Показания к назначению исследования
Когда показано проведение гистологического исследования? Этот метод диагностики используется во многих областях медицины. Особенно ценен этот метод при изучении новообразований — он позволяет определить их характер (доброкачественный или злокачественный), скорость роста, результативность терапии. Гистологические исследования широко используются в таких разделах медицины, как гастроэнтерология, оториноларингология, гинекология, урология, гематология, пульмонология, нефрология и других. Гистологическое исследование обязательно назначается при подозрении на опухоль, а также для определения стадии процесса. Его проводят перед назначением противоопухолевой терапии и во время лечения для контроля его эффективности (а также при необходимости — его коррекции).
Противопоказаний у метода практически нет — главное, чтобы была возможность взять биоптат. Ограничениями для проведения гистологического исследования могут стать нарушения свертываемости крови и аллергия на анестетики (эти факторы не позволят провести биопсию), тромбоцитопения, риск прерывания беременности, если исследование проводят женщине, ожидающей ребенка, а также некоторые заболевания, в частности, сердечная недостаточность [2] .
Как проводится гистологическое исследование: этапы процедуры
Гистологическое исследование подразделяется на несколько этапов.
Подготовка к исследованию
Зависит от способа и локализации места забора биоптата. Обычно эту процедуру проводят утром. Желательно проводить ее натощак, поскольку нередко биопсия предполагает местный наркоз или седацию. Поэтому последний прием пищи должен состояться за 8 часов до процедуры или раньше.
Взятие материала для гистологического исследования (биопсия)
Забор биоптата может производиться различными способами.
- Во время хирургической операции (так называемая инцизионная биопсия ) врач берет образец пораженной ткани.
- Щипковая биопсия — забор частички материала специальными щипчиками, которые нередко вводятся эндоскопическим методом.
- Пункционная биопсия предполагает забор материала толстой иглой. Часто используется для получения образца клеток из печени и простаты.
- Аспирационная биопсия — образец тканей получают при помощи отсасывания маленькой трубкой, этот способ используют для биопсии миоматозных узлов, узлов щитовидной железы и пр.
- Эксцизионная биопсия — хирургическое удаление пораженных органов и тканей и их последующее исследование.
- Трепан-биопсия применяется для забора жидкостей из костной ткани.
- Кюретаж — соскабливание небольшого количества ткани из полости при помощи специальной ложечки-кюреты с острыми краями.
- Мазок — забор клеток слизистых оболочек тонкой щеткой, похожей на щетку туши для глаз.
Забор биоптата — безопасная процедура, которая проводится под контролем УЗИ, риска повреждения органов нет.
Исследование материала
В современной медицине используются два способа проведения гистологического исследования.
При обычном способе полученный биоптат обрабатывают фиксирующим веществом, которое не дает ему распадаться под воздействием ферментов, и уплотняют, заливая парафином. Затем полученный препарат нарезают микротомом на «ломтики» толщиной не более 8 мкм и окрашивают. После этого препарат изучают при помощи микроскопа и выносят заключение. Обычно результаты готовы через 7–10 дней. Дольше всего приходится ждать результатов обследования биоптата костной ткани — около 2 недель.
Однако иногда результаты гистологического исследования нужны врачу немедленно, в течение часа — например, при проведении операции, когда встает вопрос о немедленном удалении или сохранении органа. В этом случае применяется ускоренная методика гистологического исследования, при которой биоптат замораживают, режут микротомом и сразу проводят микроскопию. Исследование занимает всего час или менее [3] .
Что показывает гистологическое исследование: принципы трактовки результатов
Гистологическое исследование — очень точный метод лабораторной диагностики. Ошибки крайне редки и вызваны в основном нарушением технологии при заборе биоматериала.
Как расшифровать результаты гистологического исследования? Сразу стоит оговориться, что результат, который выдается пациенту на руки, — медицинский документ, и только врач может интерпретировать его. Мы приводим лишь общую информацию об этом документе. Не пытайтесь на ее основании самостоятельно поставить себе диагноз и тем более назначить лечение.
В бланке результатов гистологического исследования всегда указывается имя пациента и его данные, дата и место забора биоматериала, тип исследованных тканей, способ исследования и растворы и препараты, которые применялись во время подготовки образца тканей.
Пациентов нередко тревожит объем заключения гистологического исследования. Обычно в заключении перечисляется огромное количество названий тканей, однако это еще не значит, что исследование обнаружило массу патологий. По правилам заключения специалист описывает вообще все типы тканей, обнаруженных в биоптате, даже если они совершенно здоровы.
Каждый тип тканей оценивается по нескольким параметрам — цвет, консистенция и плотность, наличие изменений, не вписывающихся в норму (таких, как прорастание, размягчение и пр.).
Стоимость исследования
Несмотря на всю сложность, гистологическое исследование стоит относительно недорого. В муниципальных медучреждениях при наличии полиса его делают бесплатно. Однако государственные лаборатории часто перегружены, и пациенту порой приходится долго ждать направления на биопсию и результатов анализа. Поэтому некоторые предпочитают заплатить из собственного кармана, но пройти исследование быстро. В коммерческих лабораториях стоимость гистологического исследования составляет около 3000–4000 рублей. Стоимость биопсии как таковой начинается от 1500–2000 рублей и может доходить до 8000 рублей в зависимости от сложности, способа проведения и типа биоматериала.
Гистологическое исследование требует строжайшего соблюдения технологии забора биоптата, его упаковки и перевозки. Это особенно важно, если транспортировка биоматериала от места забора до лаборатории будет долгой. Поэтому желательно, чтобы забор и исследование материала проходили в одном и том же месте (если есть такая возможность), в лаборатории, оснащенной самым современным оборудованием.
Гистологическое исследование
Гистологическое исследование – основной метод лабораторной диагностики различных новообразований и патологических структур. Позволяет изучить строение внутренних тканей пациента на примере специально взятого образца. Метод незаменим для точной постановки диагноза (особенно при диагностике раковых опухолей) и оценки медикаментозного лечения. В теоретических разделах медицины можно встретить термин «патоморфологическое исследование».
Наша клиника сделает анализ на гистологию в удобном для вас режиме. Выполняем все этапы исследования и задействуем опытных специалистов-патоморфологов для расшифровки результатов. Оформить запись на проведение анализа вы можете по указанному на сайте телефону или через онлайн-форму.
Что такое гистологическое исследование?
Гистология изучает строение клеток и тканей организма под микроскопом. С ее помощью врачи могут увидеть:
- наличие или отсутствие патологии;
- подробную структуру видоизмененных клеток;
- признаки воспалительного процесса.
Диагностике подвергают биологические жидкости и различные ткани организма – кожу, мышцы, слизистые оболочки, ликвор, костный мозг и т.п. Их извлекают с помощью биопсии или мазка и для получения максимально полной информации обрабатывают специальными составами.
На заметку! Гистология имеет общие цели с цитологией, но в отличие от последней изучает не отдельно взятые клетки, а их совокупность. Методики дополняют друга и дают возможность более точно дифференцировать тип патологии.
Методы проведения анализа
Гистологию проводят в срочном или плановом порядке. Срочная гистология актуальна во время удаления патологических структур. Для этого во время операции берут на анализ проблемный участок ткани и ждут результата для определения границ хирургического вмешательства. Изучение при этом идет по упрощенной методике (без парафиновой обработки и других сопроводительных процедур), что снижает диагностическую ценность результатов. Плановое обследование не требует спешки и включает всю последовательность этапов. Длительность срочной диагностики составляет 30–40 минут, плановой – 5–10 дней.
Кроме того, методы гистологического исследования различают по способу микроскопии. Существует 2 разновидности – световая и электронная. Первая изучает объекты в потоке видимого электромагнитного излучения, вторая – в потоке электронов. Методы световой микроскопии:
- Светлопольная – освещение проходит через объект и попадает в объектив.
- Темнопольная – освещение создают рассеянные лучи, свет в объектив не попадает (подходит для обзора прозрачных структур).
- Фазово-контрастная и интерференционная – свет задерживается на плотных участках клетки, в частности, на ядре.
- Поляризационная – специальный поляризатор позволяет объединить разнонаправленные волны света в одном направлении. Подходит для изучения объектов с двойным лучепреломлением (кристаллов, крахмальных зерен и т.п.).
- Люминесцентная – объект рассматривается в свете, излучаемым им самим.
На заметку! В современной медицине данные светового микроскопа пропускают через видеокамеру, очищают от шумов, преобразуют в цифровые данные и обрабатывают на компьютере для извлечения скрытой информации с помощью разнообразных фильтров. Это не только повышает качество изображения, но и позволяет увидеть скрытые ранее структуры.
Методы электронной микроскопии:
- трансмиссионная (просвечивающая) – обработка плоского изображения изучаемого объекта;
- сканирующая, или растровая – получение объемного изображения микрообъекта.
При обработке препаратов широко применяется метод криозаморозки для получения фактурных сколов, зон травления и ультрамикросрезов с получением детального изображения мельчайших внутриклеточных структур. Электронную микроскопию используют для диагностики в особо сложных случаях – при хромосомных патологиях, тяжелых внутриклеточных нарушениях.
Показания
Основная цель проведения гистологического исследования – выявление раковых клеток при диагностике опухолевого процесса. Его назначают при изменениях родимого пятна, появлении узелковых уплотнений, при внезапном увеличении лимфоузлов без признаков воспаления и т.п. В общей практике анализ необходим для уточнения серьезных диагнозов, требующих хирургического вмешательства или сложных методов лечения. Среди них:
- подозрение на патологические изменения печени (гепатиты, циррозы);
- заболевания ЖКТ – при эрозивных изменениях слизистой выстилки;
- диагностика щитовидной железы;
- гинекологические исследования – при лейкоплакии, воспалении матки, яичников, выраженном кровотечении, для диагностики материала после операций;
- серьезные урологические заболевания – патологии почечных тканей, стенок мочевого пузыря и т.п.
Решение о проведении гистологии принимает лечащий врач на основе проведенных тестов и с учетом общего состояния пациента. Данная процедура необходима в следующих случаях:
- подтверждение спорного диагноза, в том числе дифференциальная диагностика заболеваний;
- определение стадии патологического процесса;
- отслеживание развития болезни в динамике;
- определение границ патологии для оценки объема хирургического вмешательства;
- контроль изменений под влиянием лечебных мероприятий и отслеживание результатов лечения, корректировка дозировок.
Как проводится гистологическое исследование: этапы процедуры
Процедура проходит в несколько этапов:
- Подготовка к биопсии;
- Забор биоптата;
- Фиксация тканей и подготовка препарата для микроскопии;
- Непосредственно гистологическое исследование;
- Расшифровка результатов.
Подготовка к гистологии
Процедура подготовки зависит от места забора биоптата. В гинекологии, урологии, андрологии потребуется соблюдение определенных гигиенических правил; в пульмонологии – предварительный отказ от курения; при обследовании мышечных структур – ограничение физических нагрузок. В каждом конкретном случае все необходимые рекомендации можно получить на консультации с лечащим врачом. Процедуру проводят утром, натощак, после 8-часового воздержания от приема пищи. По мере необходимости, пациенту назначают седацию или местный наркоз.
Как берут материал на гистологию?
Основной метод извлечения материала для гистологического исследования – биопсия. Она может быть диагностической – с частичным забором образцов, и лечебной – с полным удалением образования. Необходимый биоптат можно извлечь из любого участка организма с использованием специально разработанных методов.
- эксцизионная – при хирургическом удалении всего новообразования или органа;
- инцизионная – хирургическое иссечение части пораженного органа или патологической структуры;
- пункционная – забор микроскопической части образца с помощью прокола иглой;
- аспирационная – используют для получения образца содержимого из полых органов или патологических полостей путем вакуумного отсасывания;
- трепан-биопсия – используют для получения внутрикостных материалов (нужна специальная толстая игла);
- щипцевая – используют для забора слизистых и подслизистых тканей при обследовании полых органов (в процессе гастро- или колоноскопии);
- кюретажная – использование микрокюретки позволяет получить материал со внутренних стенок обследуемых органов (преимущественно матки, влагалища).
Анализ материала
При изучении образца оценивают макроскопические и микроскопические данные. Макроскопия биоптата обращает внимание на размер материала, цвет, плотность, консистенцию, а также наличие патологических изменений. Микроскопия подразумевает подробное изучение тонких срезов, для чего биоптат проходит специальную подготовительную обработку. Процедура включает несколько этапов:
- Полученный биоптат фиксируют специальным раствором.
- Ткань обезвоживают для получения более плотной структуры.
- Заливают материал парафином или смолами (при электронной микроскопии).
- С помощью микротома нарезают полученный блок на тонкие пластинки.
- Помещают срезы на предметное стекло и делают окрашивание для получения контрастного изображения.
- Готовые препараты изучают под микроскопом.
Интерпретация результатов гистологического исследования
Преобразование изображения многочисленных двухмерных срезов в трехмерную структуру тканей требует участия специалиста высокой квалификации с опытом работы. Занимается этим врач-патоморфолог или патологоанатом. По итогам расшифровки специалист выдает заключение с указанием заключительного или ориентировочного диагноза. В документе указаны следующие данные:
- информация о пациенте;
- тип исследуемой ткани и место ее забора;
- способ исследования – срочная или плановая, используемые методики и красящие составы;
- основное заключение с подробным указанием всех выявленных тканей и обнаруженных патологических процессов (указывается макро- и микроскопическое описание, а также результаты иммуногистохимического анализа).
Расшифровка зависит от того, какая ткань подвергалась изучению. Микроскопический анализ тонких срезов позволяет выявить атипичный рост клеток, нарушение их структуры, в том числе на уровне ядра и других клеточных органелл.
Важно! Результат гистологического исследования отличается высокой точностью, так как патологию исследуют в непосредственной близости – под микроскопом, а не через толщу других тканей и органов. Врач получает доступ к клеточным структурам, которые недоступны самому чувствительному рентгеновскому или УЗИ-аппарату.
Правила и этапы приготовления препаратов для гистологического исследования
3.1.Определите суть следующих основных понятий
Биопсия | Метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей (биоптата) из организма с диагностической или исследовательской целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при подозрении на наличие онкологических заболеваний. |
Фиксация | Метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. |
Обезвоживание | Способ удаления воды из различных материалов с целью получения обезвоженного продукта. |
Уплотнение или заливка | Процесс создания блока, достаточно твердого, чтобы быть пригодным для резки (микротомирования). |
Микротомия | Подготовка гистологических срезов при помощи микротома для последующего микроскопического исследования. |
Базофилия | Химическое сродство к основаниям, в том числе, к осно́вным красителям. Базофилией в гистологии называют способность клеточных структур окрашиваться основными (щелочными) красителями (азуром, пиронином, гематоксилином и др.), обусловленная кислотными свойствами окрашивающихся компонентов клетки, главным образом нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). |
Оксифилия | Свойство цитоплазмы и других элементов клетки или волокнистых структур окрашиваться кислыми красителями (эозином, кислым фуксином и др.) |
Гистохимия | Раздел гистологии, изучающий локализацию различных химических веществ и продуктов их метаболизма в тканях. |
Авторадиография | Метод изучения распределения радиоактивных веществ в исследуемом объекте наложением на объект чувствительной к радиоактивным излучениям фотоэмульсии. |
Иммуноцитохимия | Метод морфологической диагностики, в основе которого лежит визуализация и оценка с помощью микроскопа результатов реакции антиген-антитело непосредственно в гистологических срезах. |
Световая микроскопия | Микроскопия, при которой увеличенное изображение получают с помощью оптического прибора (микроскопа), в структуру которого входят компоненты, использующие пучок света для создания видимого поля. |
Электронная микроскопия | Совокупность методов исследования с помощью электронных микроскопов микроструктур тел, их локального состава и локализованных на поверхностях или в микрообъемах тел электрических и магнитных полей. |
Сканирующая микроскопия | Метод анализа поверхностной структуры микрообъекта путем анализа отраженного «электронного изображения» (как правило, при специальном напылении и с применением метода замораживания-высушивания, что позволяет повышать электронную плотность объекта и предотвращать деформации клеточных и др. структур). |
Морфометрия | Включает совокупность приемов и методов определения геометрических характеристик исследовательских объектов-гистологических препаратов (срезов, мазков, отпечатков и т.п.) и микрофотографий. |
3.2. Отметьте в таблице название основных этапов изготовления гистологического препарата и укажите кратко сущность каждого из них
Этапы изготовления гистологического препарата | Сущность этапа |
Взятие материала | Берут кусочки органов и тканей величиной не более 1 см³. Материал желательно получать как можно раньше после смерти людей (метод исследования материала трупа человека — аутопсия). С диагностической целью материал для гистологического исследования может забираться у людей прижизненно с помощью специальных инструментов или во время операций. Этот способ получения материала носит название биопсии. |
Фиксация | Фиксация – метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры. Это достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов). Наиболее существенным изменением, происходящим в тканях под воздействием фиксатора является процесс свертывания (коагуляции) белков. Количество фиксатора следует брать в 20-100 раз больше объема кусочка фиксируемого материала. |
Помывка в воде | После фиксации материал промывают (чаще всего в течение нескольких часов в проточной воде) с тем, чтобы избавить его от избытка фиксатора и различных осадков фиксирующих жидкостей. Изучить с помощью микроскопа такие фиксированные кусочки органов невозможно, т.к. они не прозрачны. Чтобы кусочек органа можно было микроскопировать, его надо разрезать на очень тонкие пластинки – срезы. Такие срезы получают с помощью микротомов. для того, чтобы резать на микротоме кусочек ткани, ее надо предварительно уплотнить. Это достигается путем пропитывания застывающими жидкостями – расплавленным парафином. Парафин в воде не растворяется, и поэтому промытый после фиксации кусочек ткани необходимо предварительно обезводить, и только затем пропитывать. |
Обезвоживание | Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º. В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка. |
Уплотнение (заливка) | При заливке кусочки предварительно пропитываются теми жидкостями, которые служат растворителями для парафина (ксилол или толуол). При заливке в парафин кусочки из абсолютного спирта переносятся в смесь абсолютного спирта с хлороформом или ксилолом, взятых поровну, затем чистый ксилол и, наконец, в расплавленный насыщенный раствор парафина в хлороформе, где они находятся в термостате при температуре 37º до 1 суток и более. Дальнейшая заливка проводится в термостате при температуре 54º -56º в трех порциях парафина. Окончательная заливка проводится в парафин с добавлением воска, который наливают в специальные бумажные коробочки или стеклянные чашки, а затем эти коробочки или чашки после появления на поверхности парафина пленки, погружают в воду. Происходит полное затвердение парафина. Кусочки с окружающим их парафином извлекают из коробочек и с помощью расплавленного парафина, наклеивают на деревянные кубики, получаются парафиновые блоки. Уплотнения также можно добиться замораживанием кусочка органа (срочная биопсия). |
Приготовление срезов | Срезы с блоков изготовляются на микротоме. Наиболее распространены микротомы санный и замораживающий. В специальных устройствах микротома зажимается парафиновый блок и микротомный нож. |
Окрашивание | Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (растворением в ксилоле). Окрашивание необходимо производить для того, чтобы отчетливо выявить под микроскопом тонкие структуры объекта. По окрашиванию определенных гистологических структур различают краски ядерные (окрашивание ядра), цитоплазматические (окрашивающие цитоплазму), и специальные, окрашивающие избирательно определенные структуры. |
Заключение среза | Окрашенные и промытые в воде срезы во избежание помутнения обезвоживают в спиртах (70º, 96º), просветляют в карбол-ксилоле, ксилоле, а затем на предметное стекло, где находится срез, помещают каплю бальзама и срез накрывают покровным стеклом. Бальзам представляет собой растворенную в ксилоле смолу одного из видов сосны, растущей в Канаде (канадский бальзам), смолу пихты (сибирский бальзам) или специальную синтетическую среду. При исследовании биопсий с целью уточнения диагноза в гистологических лабораториях прибегают к ускоренной обработке материала. Кусочки тканей и органов при этом проходят те же этапы обработки, но за 5-7 дней. Иногда производится так называемая срочная биопсия, когда в течение 15-80 мин. материал фиксирует, получают срезы, окрашивают их и заключают. Быструю фиксацию производят в 10% формалине, подогреваемом пламенем горелки или с использованием СВЧ-печи. Уплотнения добиваются замораживанием (хлорэтилом, углекислотой или с помощью замораживающего микротома). |
3.3. Основные гистологические красители и реакции (в столбце «результат» заполняется, в какой цвет окрашиваются красителями ядра, цитоплазма, включения, волокна и т.д.)
Реагент | Результат |
Гематоксилин | Окрашивает базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. |
Эозин | Окрашивает эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом. |
Орсеин | Используется для выявления эластиновых волокон, особенно это актуально в патологической анатомии кровеносных сосудов. Эластические волокна соединительной ткани окрашиваются в тёмно-красный цвет; остальные структуры — в слабо-розовый цвет. |
Серебрение | Солями серебра используют для выявления нервных клеток, нейроглиальных элементов, периферических нервных волокон и их окончаний, ретикулярной стромы органов, межклеточного вещества эпителия и гладкой мускулатуры, бледных трепонем и др. С целью улучшения качества препаратов срезы после серебра нередко тонируют солями золота, окрашивание в фиолетовый цвет. |
Железный гематоксилин | Железный гематоксилин Вейгерта должен окрашивать ядра в черный цвет. Если они приобретают коричневый цвет, то это свидетельствует о порче красителя. Железный гематоксилин Гейденгайна окрашивает в черный цвет не только ядра, но и митохондрии, темные диски скелетной и сердечной мышечной ткани и другие структуры. |
Реактив Шиффа | Позволяет выделить гликоген и гликопротеины (лиловый цвет). Соединительная ткань, хрящ, костная ткань, железистые клетки и структуры ткани почек окрашиваются в лиловый цвет. Ядро окрашивается в синий. |
Романовский Гимза | Посредством данного метода окраске подлежат ацидофильные образования в разные оттенки красного цвета. Образования базофильного характера окрашиваются в цвет от пурпурного до синего. |
3.4.Заполните таблицу, перечислив основные группы красителей, укажите название структур, воспринимающих краситель, и примеры красителей
Гистологическое исследование биопсийного материала
Гистологическое исследование биопсийного материала проводят после различных эндоскопических процедур и операций со взятием образца на анализ. Его задача состоит не только в обнаружении раковых клеток, но и любых патологических изменений в тканях. Гистологическое исследование помогает установить точный диагноз и назначить эффективное лечение.
Для чего назначается
Гистологическое исследование – это микроскопическое изучение биоматериала, взятого в патологическом очаге больного. Это самый точный метод для обнаружения опасных клеток, он является обязательной процедурой в обследовании пациента с подозрением на онкологию. Ценность его результатов несравнима с ультразвуковым исследованием или рентгеном.
Задачи гистологического исследования:
- установление, подтверждение, уточнение или опровержение серьезных диагнозов;
- обнаружение онкологии на ранней стадии;
- подтверждение или опровержение злокачественности новообразований;
- установление стадии и динамики опухолевого процесса;
- обнаружение наиболее действенных лекарств для дальнейшего лечения;
- проверка эффективности терапии по анализу изменений в тканях;
- диагностика состояния органов при тяжелых патологиях, например, циррозе печени;
- получение данных для плановой операции и т. д.
Для получения подробной консультации необходимо записаться на прием к узкому специалисту в медицинский центр. Врач определит целесообразность биопсии и вид вмешательства.
Цена исследования напрямую зависит от сложности процедуры.
Подобные процедуры планируются заранее (кроме срочной биопсии во время операции). Манипуляции по взятию биоматериала для исследования требуют подготовки пациента.
Биопсия проводится с применением анестезии, поэтому перед процедурой нельзя есть и пить. Необходимо сделать анализ крови на наличие ряда инфекций. Пациенту даются рекомендации по поводу исключения определенных препаратов за несколько дней до исследования.
Клиники используют несколько способов взятия биопсийного материала на гистологическое исследование.
Методика забора биоптата
Взятие материала толстой полой иглой путем пункции патологического очага. В результате манипуляции получают столбики тканей.
Отсечение части органа или опухоли в ходе хирургической операции.
Отсасывание содержимого вакуумом из патологических образований, например, миомы матки или узлов в щитовидке.
Иссечение целого органа или новообразования с последующим вырезанием из него фрагментов для анализа.
Взятие образца специальными биопсийными щипцами при бронхоскопии, колоноскопии, ФГДС и т. д.
Процедура соскабливания со стенок естественных и патологических полостей, например, матки. Полученный материал отправляется в лабораторию.
Используется чаще всего в гинекологии. Подразумевает взятие мазка со слизистой.
В медицине существуют и другие методы забора биоматериала для гистологии.
Техника проведения процедуры
Лаборатории используют два метода реализации гистологического исследования:
Первый используется в плановом порядке, второй – во время хирургических вмешательств.
Традиционный способ
Этот метод применяется при плановой биопсии, срок получения результатов – 5-7 (иногда 10-14) дней. Образцы тканей окрашиваются специальными составами, что позволяет различить элементы клеток или ткани. Ядра окрашивают одним цветом, а для цитоплазмы используют контрастный краситель.
Далее образцы заливаются расплавленным парафином и нарезаются на микрослои толщиной 1-8 микрон. Полученные пластины наносят на предметное стекло, подсушивают и изучают под микроскопом. Одно из главных преимуществ традиционного метода в том, что образцы на стекле хранятся неограниченное время и пациент может их получить на руки. При желании можно перепроверить диагноз.
Срочный способ
Ускоренный метод позволяет исследовать образцы в течение 1 часа. Такой способ ценен, когда хирург должен принять незамедлительное решение об удалении или сохранении органа оперируемого больного. Биоматериал не обрабатывается парафином. Его замораживают, послойно насекают, помещают на предметное стекло и окрашивают. Затем образцы изучают под микроскопом.
Правила забора материала
Достоверность результатов гистологического исследования во многом зависит от соблюдения правил забора биоптата.
Общие нормы по сбору и хранению биоматериала:
- Биопсийные процедуры проводят острым инструментом во избежание деформации материала.
- Биоптат из патологического образования берется из центра и на границе со здоровыми тканями.
- Рекомендации к иссеченному образцу: небольшой размер, плоская форма, толщина 3-5 мм. Эти условия необходимы для равномерной фиксации биоптата.
- После забора материала его немедленно помещают в емкость с нейтральным формалином (10%). Соотношение объема биоматериала и фиксатора должно быть 1:10.
- Запрещается помещать несколько биопсийных образцов в одну посуду.
- Емкость с формалином плотно закрывают во избежание испарения содержимого и высыхания биоптата.
- Строго запрещено разделение биоматериала на части для отправки в несколько лабораторий. Патологические изменения могут быть обнаружены только в одной из частей исследуемой ткани. Это может привести к получению противоречивых результатов.
- Образец маркируют (ФИО больного, откуда взяты ткани, дата) и отправляют в патогистологическую лабораторию.
Расшифровка результатов
Врач-патоморфолог составляет заключение с подробным описанием обнаруженных морфологических изменений в тканях и выносит предварительный диагноз.
Пациенту на руки выдается бланк-заключение с развернутым описанием результатов патоморфологического исследования. Не рекомендуется самостоятельно интерпретировать полученные данные. Расшифровка результатов гистологии, постановка окончательного диагноза и назначение лечения исключительно в компетенции квалифицированного врача.
Результаты подобных исследований практически не содержат погрешностей и дают исчерпывающую информацию для постановки диагноза. За исключением случаев, когда собран недостаточный объем биоматериала или изменения в тканях незначительны. Также ошибки возможны при неправильном заборе и хранении биоптата.
Что такое гистологическое исследование?
Сегодня уже невозможно себе представить полноценное лечение злокачественного образования без гистологического исследования. Вместе с тем мало кто имеет четкое представление о таком методе диагностики. В статье расскажем о том, как осуществляется проведение гистологического исследования, и о том, зачем оно необходимо. Также поговорим об использовании диагностики такого рода в гинекологии.
Что собой представляет
Гистологический метод исследования заключается в изучении внутренних тканей организма больного, которые берутся в виде маленького образца. Зачастую материал получают посредством биопсии. В диагностике раковых опухолей и оценке правильности медикаментозной терапии гистологическое исследование – один из самых важных этапов.
Цели проведения
Такая диагностика проводится для уточнения или подтверждения ранее поставленного диагноза. Также она помогает верно определить заболевание в спорных ситуациях. Гистологическое исследование материала больного дает возможность на ранней стадии выявить наличие злокачественного образования, изучить динамику его роста (определить, есть ли разрастание, увеличение, распространение опухоли). Кроме того, с помощью него осуществляют дифференциальную диагностику патологических процессов и анализируют изменения, происходящие в ходе лечения в тканях.
Значение в медицине
В настоящее время перед проведением химиотерапевтического или лучевого лечения больных со злокачественными образованиями обязательно назначается гистологическое исследование опухоли. Также без него не проводится ни одна хирургическая операция, связанная с онкологией. Помимо этого, тщательное изучение тканей пациентов нужно для того, чтобы вовремя обнаружить даже малейшие изменения в опухолевом процессе и своевременно принять меры.
Но в лечении не только раковых больных используется гистологическое исследование. Биопсия крайне важна при выборе оптимальной лечебной программы для пациентов с заболеваниями, изучением которых занимаются такие отрасли и разделы медицины, как гинекология, гастроэнтерология, урология, пульмонология, оториноларингология, гематология, нефрология, торакальная и абдоминальная хирургия и др.
Выполнение забора материала
Необходимый для осуществления исследования материал можно получить из любых тканей и внутренних органов пациента. Сегодня имеется много способов произвести данную процедуру:
- Иссечение необходимого количества тканей в процессе хирургической операции (эксцизионная биопсия).
- Прокол полости пораженного органа или злокачественного опухолевого образования при помощи специальной длинной иглы. Такие иглы представлены в различных конструкциях и видах. Посредством пункционной биопсии проводится, к примеру, гистологическое исследование печени.
- Вырезание или отрезание из удаленных внутренних органов небольших кусочков ткани.
- Скусывание специальными щипцами нужного количества ткани при выполнении эндоскопических манипуляций: колоноскопии, бронхоскопии, эзофагогастродуоденоскопии. Такой способ носит название щипцовой биопсии.
- Отсасывание небольшого количества материала из полых внутренних органов (аспирационная биопсия).
- Кюретаж внутренних стенок патологических и естественных полостей. Таким способом проводят, например, гистологическое исследование шейки матки и остеомиелитической полости.
Особенности процедуры
Чтобы получить наиболее достоверные и правильные результаты, необходимо строго выполнять правила забора биологического материала. Образцы ткани, как уже говорилось, можно взять в ходе хирургической операции, когда, к примеру, удаляют часть органа или его целиком, или же в результате биопсии. Большинство врачей предпочитают вторую методику забора материала, она является гораздо более распространенной.
Гистологическое исследование может осуществляться посредством изучения как целого опухолевого образования, так и небольшого столбика ткани. Часто биопсию выполняют с помощью очень длинной и тонкой иглы, которая предназначена для внутримышечных инъекций. Но в отдельных случаях применяют иглу большего диаметра – это делает процедуру более болезненной, но и более эффективной, поскольку специалисты получают возможность провести еще и иммуногистохимический анализ.
Методы диагностики
Есть два методы выполнения гистологического исследования – традиционный и ускоренный. В первом случае полученные образцы ткани сначала заливают расплавленным парафином, а потом нарезают на пластины толщиной 1-8 мкм и подвергают окрашиванию. При применении такого способа данные анализа будут готовы через пять-десять дней.
При использовании ускоренной методики результат гистологического исследования может быть получен в течение часа. В этом случае биологический материал, взятый у пациента, экстренно замораживают, а затем делают в нем послойные тончайшие разрезы и внимательно изучают под микроскопом. Такой метод незаменим, когда хирургу при выполнении операции нужно срочно принять решение относительно того, удалять орган больного или сохранять.
Если гистологическое исследование планируется выполнять не в ближайшее время, а позже, то ткани с целью сохранения структуры заливают спиртом, раствором формалина или осмиевой кислотой. Что касается твердых материй, то их тщательно размягчают.
Результаты анализа
Гистологический метод исследования имеет высокую точность. Это обусловлено тем, что ткани пораженного органа изучаются под микроскопом, а не рассматриваются сквозь другие ткани и органы, как это происходит во время рентгена или ультразвукового исследования. Именно по этой причине гистологический анализ считается наиболее важным для постановки итогового диагноза. Кроме этого, благодаря микроскопии и обязательному окрашиванию тканей пациента специалисты имеют возможность получить самые точные данные о текущем состоянии пораженного органа. Зная утвержденные стандарты структуры тканей и внутренних органов в здоровом состоянии, врач легко может провести оценку патологических изменений и оперативно установить наличие заболевания, а также его степень.
По результатам исследования специалист дает заключение. В нем может стоять ориентировочный или заключительный диагноз, а в ряде случаев дается только описательный ответ, позволяющий высказать лишь предположение о характере патологии (при недостаточности клинических сведений или материала).
Ориентировочный диагноз дает возможность определить круг заболеваний для выполнения дифференциального исследования, а заключительный ответ выступает основой для формулировки клинического диагноза.
Ошибочные данные
Многих пациентов интересует вопрос о том, могут ли быть получены ошибочные результаты при гистологическом исследовании. Такое случается, как правило, если врач неверно выполнил забора биоматериала. Например, взял много здоровых тканей, а пораженный участок органа практически полностью пропустил. Также причиной ошибки могут стать неправильные условия хранения тканей больного или же серьезные нарушения, допущенные во время их подготовки к хранению.
Помимо этого, для получения достоверного результата огромное значение имеет количество срезов – чем их будет больше, тем лучше, поскольку если срезов недостаточно, пораженный участок ткани можно и пропустить, в таком случае тщательного изучения не будет проведено.
Нередко ошибки при осуществлении такой диагностики объясняются недостаточной квалификацией гистолога и отсутствием взаимопонимания между ним и врачом, производящим лечение больного.
Гистологические исследования в гинекологии
В этой отрасли медицины рассматриваемый метод диагностики имеет большое значение. В гинекологии нашли свое применение все гистопатологические виды исследования. Их использование дает возможность установить диагноз с наибольшей степенью достоверности в случае различных патологий женской репродуктивной системы. Особо важную роль играет гистологическое исследование матки, ее придатков, а также шейки матки. Такая диагностика позволяет выявлять онкологические заболевания, а также определять причины замерших беременностей и самопроизвольных выкидышей.
Гистологическое исследование эндометрия
Такой вариант диагностики в гинекологии дает возможность правильно оценить функционирование яичников и своевременно выявить любые патологические процессы, происходящие в них. Если у женщины еще продолжается менструальный цикл, гистологическое исследование эндометрия осуществляют примерно за три дня до начала очередных месячных. В том случае если у пациентки имеют место дисфункциональные кровотечения, соскоб требуется брать непосредственно во время кровотечения.
Полученные посредством диагностического выскабливания биологические ткани для проведения исследования окрашивают при помощи гематоксилина или эозина. В некоторых случаях применяется методика Ван Гизона. После окрашивания путем анализа определяют строение стромы и желез, выявляют все особенности эндометрия. Во время лютеиновой фазы менструального цикла здоровые железы отличаются пиловидной формой, они слегка расширены. Сами клетки железистого эпителия при этом имеют светлую цитоплазму и бледные ядра, а в железах в обязательном порядке обнаруживается секрет.
Гистология шейки матки
Диагностика проводится путем забора из нижнего сегмента детородного органа небольшого количества тканей. Если при проведении анализа в них обнаруживаются незначительные патологические изменения, то можно утверждать о наличии у пациентки доброкачественного образования или воспалительного заболевания. В том случае если клеток с патологическими изменениями выявлено много, говорят о развитии злокачественной опухоли или предраковом состоянии.
Гистология матки
Гистологическое исследование детородного органа осуществляется исключительно по показаниям. Такая диагностика выполняется, если, к примеру, женщину мучают боли в нижней части живота или у нее наблюдаются длительные маточные кровотечения, если выявляется опухолевое образование при прощупывании живота и так далее.
Биологический материал берется для исследования во время диагностической гистероскопии – это малоинвазивное обследование внутренней поверхности детородного органа посредством гистероскопа – специального оптического прибора. Надо отметить, что процедура является довольно сложной, осуществляется зачастую под общим наркозом (в редких случаях применяют местное обезболивание). Инструментами, входящими в состав гистероскопа, специалист берет кусочки ткани, которые затем отправляются на гистологическое исследование, в ходе которого можно точно установить, что послужило причиной неприятных симптомов. Такая диагностика также позволяет отличить доброкачественное образование (к примеру, миому) от злокачественного.
Гистология яичников
В этом случае забор биологического материала для гистологического анализа выполняют посредством пункционной биопсии (делают прокол передней брюшной стенки). В настоящее время такая процедура осуществляется под контролем ультразвукового исследования – это дает возможность получить ткань непосредственно из тех участков, которые вызывают подозрение. Проведение такой диагностики позволяет отличить доброкачественную опухоль и кисту от рака яичника.